Na początku była kula - Mad Moon. Ciało to więziło w sobie dwie starożytne istoty, zamknięte w głębi przez niepojęte siły wyższe. Po wielu latach Księżyc eksplodował, tworząc dwie przeciwległe sobie połówki – Ancient Radiant (Świetliści) oraz Ancient Dire (Mroczni).

Te zamieszkane zostały przez rozmaite stworzenia, oferując im tajemniczą moc, energię czy możliwość zmartwychwstania. Wyznawcy Świetlistej i Mrocznej mocy nie mogli jednak żyć tuż obok siebie, przedzieleni jedynie wąską rzeką. Po latach pokoju rozpoczęto więc wojenne działania, mające na celu zniszczenie drugiej strony i tym samym odblokowanie pełnej mocy, blokowanej dotychczas przez przeciwną połówkę.

Wojna, jak to zwykle bywa, przyciągnęła do krainy licznych bohaterów i poszukiwaczy przygód, gotowych postawić się po jednej ze stron barykady. Każdy z herosów posiada swoją własną historię, bogato przedstawioną na kartach gry. Fabularnie DOTA 2 nie nawiązuje do swojego pierwowzoru – modu do WarCrafta 3, zatytułowanego Defense of the Ancients. Niemniej, nie sposób nie zauważyć nawiązań do samego RTS-a od Blizzarda, przejawiających się pod postacią bliźniaczo podobnych herosów, ich umiejętności czy zbliżonej konstrukcji samego świata.